Форумы >> Обменяемся опытом >> Метод подсчета микроколоний (Архив)                тему, страницу Метод подсчета микроколоний Как подсчитать микроколонии? Pegas @ 02.02.2009 17:07 RE: Метод подсчета микроколоний В стерильную пробирку наливают 1 мл расплавленного и охлажденного до 45°С 2—3%ного тщательно отфильтрованного агара и 1 мл исследуемого материала. 0,5 мл тщательно перемешанной смеси наносят на предметное стекло и распределяют на площади 8 см (предметное стекло слегка подогревают, а границы площади отмечают по шаблону). Через 1—2 мин после нанесения мазка предметное стекло помещают во влажную камеру, для этого используют эксикаторы или чашки Петри с дистиллированной водой (крышку слегка приоткрывают). Посевы выдерживают при 30°С в течение 6 ч, затем подсушивают при 45°С (в термостате). Высушенный мазок окрашивают в течение 2—3 с слабым раствором (1:9) метиленового голубого так же, как и обычный мазок. Краску смывают, препарат высушивают и просматривают с масляной системой. При окуляре 4х, объективе 90 и длине тубуса 160 мм площадь поля зрения будет равна 0,0553 мм Для упрощения расчета количество микроколоний в одном поле зрения умножают на 57 800. Полученное число умножают еще на разведение и получают количество клеток в 1 мл или 1 г продукта. Посев в жидкие среды (метод предельных разведений, метод титрования). В пробирки (или колбы) с жидкой средой вносят строго определенный объем из различных разведений исследуемого продукта. После инкубации регистрируют наличие или отсутствие роста, результаты обрабатывают статистически с помощью специальной таблицы и затем рассчитывают число клеток, содержащихся в 1 г (1 мл) исходного субстрата. Питательную среду, благоприятную для развития учитываемых микроорганизмов, предварительно разливают в пробирки или колбы и стерилизуют. Во все пробирки наливают одинаковый объем среды. Посев проводят из нескольких разведений с таким расчетом, чтобы в опыт попало то разведение, при высеве из которого рост будет во всех параллельных сосудах, а также то последующее разведение, которое не даст роста ни в одной из параллельных пробирок. Каждое разведение засевают в 2—5 параллельных пробирок, начиная с большего разведения. Количество посевного материала во всех пробирках одинаково и соответствует 1 мл. После инокулирования среды пробирки выдерживают при температуре, благоприятной для роста микроорганизмов. После инкубации отмечают наличие или отсутствие роста микроорганизмов по характерным для данной группы признакам: визуально — по свертыванию, кислотообразованию, помутнению, газообразованию. Затем по таблице МакКрэди , разработанной на основании методов вариационной статистики, определяют наиболее вероятное количество микроорганизмов. LM @ 11.02.2009 16:55 RE: Метод подсчета микроколоний LM, Спасибо Pegas @ 12.02.2009 16:25 RE: Метод подсчета микроколоний Pegas, Зачем вам? Пусть лаборатория этим занимается new @ 13.02.2009 17:14 Всего записей: 4 | Показаны: [1 - 4]