Форумы >> Обменяемся опытом >> Методика ВНИИМСа (Архив)                тему, страницу Методика ВНИИМСа Что за методика ВНИИМСа, используемая при образовании углекислого газа? Pegas @ 17.05.2011 11:41 RE: Методика ВНИИМСа Pegas, В пробирку диаметром 15 мм наливают 20 мл исследуемой культуры (комбинации, закваски), отмечают уровень и ставят на водяную баню с холодной водой. Температуру воды доводят до 90°С и, не вынимая пробирки, отмечают уровень. Если культура образует СОг, то сгусток становится губчатым и поднимается над сывороткой от 0,6 до 2—5 см и более. Образование четырехуглеродных соединений по креатиновой пробе. Культуры ароматобразующих стрептококков, комбинации и закваски мезофильных молочнокислых стрептококков, полученные на стерильном обезжиренном молоке, нагревают на водяной бане при температуре 42—45°С и фильтруют через бумажный фильтр. На белую фарфоровую пластинку наносят в равном количестве (1 капля) фильтрат, 40%-ный раствор КОН и 0,04%-ный раствор креатина и тщательно перемешивают. Отмечают продолжительность появления розового окрашивания, по которому ориентировочно судят об образовании четырехуглеродных соединений (диацетила+ацетоина). Если порозовение произошло менее чем за 7 мин, то штамм или закваска считаются хорошими продуцентами четырехуглеродных соединений. Если же появление розового окрашивания отмечается после 7— 10 мин, то это указывает на слабую ароматобразующую способность микроорганизмов. Количественное определение четырехуглеродных соединений в культурах и заквасках. При определении диацетила в специальные пробирки вносят 20 мл культуры (или закваски), присоединяют их к коллектору аппарата и погружают в воду с постоянной температурой (65°С). В маленькие центрифужные пробирки (на 10 мл) наливают 1 мл буферного раствора гидроксиламина. Пробирки помещают в ловушки, которые присоединяют к системе. Затем через всю систему в течение 1,5 ч пропускают азот. Скорость пропускания азота должна составлять 5—7 пузырьков в секунду, ее систематически контролируют специальным приспособлением. Затем ловушки с центрифужными пробирками отсоединяют от системы и погружают на 10 мин в горячую воду (75°С), после выдержки пробирки вынимают из бани и сразу же добавляют 0,5 мл ацетонфосфата. После охлаждения добавляют 1,5 мл раствора щелочного тартрата и пробирки встряхивают, затем добавляют 0,1 мл сульфата железа (II) и вновь быстро встряхивают. Общий объем доводят до 5 мл внесением 33Мойого раствора К2НРО4 и колориметрируют на фотоэлектроколоримет-ре в кювете при толщине слоя 5 мм и длине волны 530 нм (зеленый фильтр). При определении оптической плотности исследуемого раствора контролем является вода. При определении ацетоина в специальные пробирки наливают 5 мл исследуемой культуры (или закваски) и 1 мл 20%-ного раствора FeCb, тщательно перемешивают и добавляют пемзу или какой-либо другой пеногаситель. Далее анализ осуществляют так же, как и при определении диацетила. По данным оптической плотности к стандартной кривой, построенной с применением химически чистой-диацетила, вычисляют содержание диацетила и ацетоина в исследуемых образцах. maman @ 18.05.2011 12:29 Всего записей: 2 | Показаны: [1 - 2]