Форумы >> Обменяемся опытом >> Методы исследования бифидобактерий (Архив)                тему, страницу Методы исследования бифидобактерий Как приготовить стандартные взвеси каждого штамма бифидобактерий ? new @ 01.06.2011 13:30 RE: Методы исследования бифидобактерий new, Определение антагонистической активности бифидобактерий. Антагонистическую активность бифидобактерий определяют методом совместного выращивания на жидких средах с тест-штаммами с последующим высевом на плотные среды. В качестве тест-штаммов берут 8 штаммов: Е. coli, S. aureus, Pr. vulgaris, Ps. mirabilis, Kl. pneumonia, Sh. flexneri, Sh. sonnei, Salmon typhimurium. Тест-штаммы выращивают на скошенном мясопептонном агаре в течение 18—20 ч, затем смывают стерильным физиологическим раствором и по оптическому стандарту мутности готовят микробную взвесь, соответствующую 10 ед. по стандарту мутности. Из 16—24-часовой культуры бифидобактерий, выращенной на кукурузно-лак-тозной среде, готовят такую же взвесь. Приготовленные стандартные взвеси каждого штамма бифидобактерий и тест-культур вносят по 1 мл в пробирки с казеиново-дрожжевой средой № 5 или кукурузно-лактозной средой, разлитой по 9 мл. Контролем служит то же количество микробной взвеси каждого тест-штамма, внесенного в выше названные среды. Посевы инкубируют при 37—38°С в течение 48 ч., После двухсуточного выращивания из посевов смешанных культур и контрольных делают десятикратные разведения в физиологическом растворе. Из разведений 10~5, Ю-6 и 10~7 контрольных посевов и из разведений Ю-3, Ю-4, 10~5 опытных высевают по 0,1 мл суспензии на чашки со средой Эндо для учета эптеробактерпй и с мясопептонным агаром — для стафилококков. Кайлю микробной взвеси равномерно растирают шпателем по поверхности агара и инкубируют при температуре 37±1°С в течение 24 ч. Для оценки степени антагонистического действия бифидобактерий на тест-штаммы подсчитывают колонии тест-микробов, выросших на плотных питательных средах после совместного культивирования с бифидобактериями и в монокультуре. Количество колоний тест; штамма, выросших в монокультуре, принимают за 100%. Вычисляют процент выживших клеток тест-культур в смешанных посевах но сравнению с контролем. Он не должен превышать 1—2%. Определение ферментативной активности (сбраживания углеводов) бифидобактерий. Определение сбраживания углеводов производят следующим образом. Суточную культуру штамма бифидобактерий, выращенную в жидкой питательной среде (Гисса), разводят до Ю-4 в физиологическом растворе. Микробную взвесь из указанного разведения вносят по 0,1 мл в пробирки со средой, содержащей углеводы, и в контрольную без углеводов. Посевы инкубируют при температуре 37±1°С в течение 14 сут и просматривают на 3, 5, 7, 10 и 14-е сутки. Реакцию считают положительной, если при наличии роста в пробирке с углеводом цвет меняется из фиолетового на желтый. Реакция отрицательная, если цвет среды не меняется. При замедленной реакции цвет среды меняется лишь на 10—14-е сутки. Определение органолептических показателей бифидобактерий. Исследуемые штаммы бифидобактерий пересевают с кукурузно-лактозной среды в количестве 5% на стерильное обезжиренное молоко с 0,5% кукурузного экстракта и термостатируют при температуре 37±1°С. Полученную закваску используют для повторного заквашивания стерильного молока с кукурузным экстрактом, термостатируют при той же температуре. После сквашивания его охлаждают и проводят органолептическую оценку. Определение газообразования бифидобактернй на плотной питательной среде. Исследуемый штамм бифидобактернй уколом засевают в столбик с плотной питательной средой для культивирования бифидобактернй, содержащей 1,5—2% агара. Посевы термостатируют при температуре 37±ГС в течение 2—3 дней, после чего их просматривают. Штаммы, которые могут быть отнесены к бифидобактериям, не должны образовывать газа. Поэтому в питательной среде по всей линии укола не должно быть трещин и пузырьков газа. Исключение представляют штаммы вида В. adolescentis, образующие незначительное количество углекислого газа. Определение образования каталазы. На предметное стекло с 1—2 каплями 3%-ного пероксида водорода вносят 1 колонию штамма бифидобактернй, выращенного на полужидкой питательной среде. При этом не должно образовываться пузырьков газа, так как бифидобактернй каталазоотрицательные. Определение отношения культур бифидобактернй к желатину. Способность бифидобактернй не разжижать желатин определяют путем посева исследуемого штамма в пробирку с любой из питательных сред для культивироваїшя бифидобактернй, содержащей вместо агара 10% желатина. Посевы термостатируют при температуре 38±1°С в течение 48 ч. Затем пробирки помещают на одни сутки в холодильник, после чего просматривают. В посевах не должно быть никаких следов разжижения желатина. LM @ 03.06.2011 11:54 Всего записей: 2 | Показаны: [1 - 2]