Как определить вид кишечной палочки?
В микробиологической практике используется большое количество питательных сред для учета бактерий группы кишечной палочки.
Стандартный метод определения бактерий группы кишечной палочки. Готовят ряд десятикратных разведений исследуемого продукта. В качестве питательных сред используются среды Кесслер, Эндо, Козера, среда с глюкозой.
Определение бродильного титра. По 1 мл соответствующих разведений продукта (табл. 164) засевают в пробирки с 5 мл ареды Кесслер. Посев 10 мл пастеризованного молока, отобранного после пастеризатора, 10 мл закваски на чистых культурах или 10 мл разведения 1 : 10 qyxnx молочных смесей «Малютка» и «Малыш» и сгущенного молока с сахаром производится в колбочки с 40—50 мл среды Кесслер.
Пробирки или колбочки с посевами помещают в термостат при 37±1 °С на 18—24 ч. Просматривают пробирки с посевами и по наличию газообразования в них определяют количество бактерий группы кишечной палочки. При отсутствии газообразования через 18— 24 ч продукт считают не загрязненным бактериями группы кишечной палочки. Для сухих и сгущенных молочных консервов, сухих и жидких смесей «Малютка», «Крошечка» и «Малыш», творога, сметаны, масла и сыра анализы на этом заканчивают.
При исследовании мороженого пробирки с посевов выдерливают в термостате при 37±1 °С в течение 48 ч.
Если при контроле цельномолочных продуктов (пастеризованного молока и сливок, кисломолочных напитков) бактерии группы кишечной палочки обнаружены в объеме менее 0,3 мл (т. е. газообразование обнаружено в 5—6 пробирках), то допускается проведение дальнейшей идентификации.
Идентификация бактерий группы кишечной палочки. Из пробирок, в которых наблюдается брожение, проводят посев на среду Эндо с таким расчетом, чтобы получить отдельные колонии. Для этого берут петлей посевной материал и высевают культуру частым штрихом. Перед посевом дно чашки со средой Эндо делят на четыре сектора. Посев из каждой пробирки со средой Кесслер производят на отдельный сектор. Чашки с посевами помещают крышками вниз в термостат с температурой 37±1 °С на 18—24 ч. Если газообразование обнаружено в пробирках с большим разведением и отсутствует в пробирках с предыдущим разведением, то на среду Эндо высевают из всех пробирок с предыдущим разведением.
При отсутствии на среде Эндо колоний, типичных для бактерий группы кишечной палочки (красных, с металлическим блеском, розовых, бледнорозовых), продукт считают не загрязненным кишечной палочкой. При наличии на среде Эндо колоний, типичных для бактерий группы кишечной палочки, их изучают. Из изолированных колоний, характерных для бактерий группы кишечной палочки, делают препараты, окрашивают их по Граму и микроскопируют, Микробы, красящиеся по Граму, будут темнофиолетового цвета, не красящиеся по Граму (бактерии группы кишечной палочки) — красного цвета.
Из одной и той же проверенной колонии грамотрицательных палочек с каждого сектора среды Эндо проводят высевы петлей на среду Козера и на среду с глюкозой. Пробирки с посевами помещают в термостат и выдерживают 18—24 ч при температуре 37±1 °С (посев на среде Козера) или при 43±1°С (посев на среде с глюкозой) .